| 金黄色葡萄球菌铁调节表面决定子（IsdA）缺失突变株的构建 |
| 发布时间:2021-06-13 18:24:16 | 浏览次数： |
| 目的：构建金黄色葡萄球菌铁调节表面决定子（IsdA）缺失突变株。方法：从金黄色葡萄球菌Newman的基因组DNA中扩增了IsdA基因的上、下游片段；以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌穿梭质粒pMAD（含有温度敏感性的复制起点，红霉素抗性基因（erm）和β-半乳糖苷酶基因（bgaB）为筛选标记）为骨架，构建基于IsdA基因位点的同源重组载体pMAD?IsdA，该载体经金黄色葡萄球菌RN4220修饰后再转入金黄色葡萄球菌Newman。经过在30℃和42℃交替培养，通过抗生素抗性和β-半乳糖苷酶活性筛选IsdA基因缺失突变株。结果：筛选得到的突变菌株，经基因组PCR、定量PCR及序列分析表明，金黄色葡萄球菌β基因组中的IsdA基因被成功地敲除。结论：利用同源重组的方法构建了金黄色葡萄球菌β缺失突变株，为金黄色葡萄球菌IsdA基因功能的研究奠定了基础。 |
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